抗击疫情 I α干扰素分析条件筛选

α干扰素在机体控制病毒感染方面发挥重要的作用，在自然情况下，α干扰素是人类应对病毒感染非常重要的免疫保护性细胞因子，具有广谱抗病毒和免疫调节作用。

它的广谱抗病毒作用并不是直接杀灭病毒，而是通过与人体细胞表面的受体结合，刺激细胞表达多种抗病毒蛋白，影响细胞代谢过程，包括降解病毒RNA，并抑制病毒RNA和蛋白质的合成，因而IFN-α具有广谱的抗病毒活性。

对于未受病毒感染的细胞，α干扰素通过诱导细胞产生抗病毒蛋白而建立“抗病毒状态”，可以避免细胞受到病毒的感染。正因为α干扰素上述抗病毒和免疫调节的机制，也成为了此次疫情抗击战中的一员大将。

α干扰素作为蛋白质治疗药物，反向色谱在其生产，储存以及稳定性研究中常见修饰手段的表征中都起到了重要作用。本文将从Jupiter 300各类键合相的筛选角度展开讨论。

实验条件：

色谱柱：

Jupiter 300 5μm C18

Jupiter 300 3μm C18

Jupiter 5μm C4

Jupiter Proteo 4μm C12 

(色谱柱规格均为150×2㎜)

流动相A：0.1%TFA，2%ACN

流动相B：0.085%TFA, 90%ACN

流速：0.3mL/min

检测波长：220nm

肽图分析梯度条件：

完整蛋白分析梯度条件

利用不同蛋白酶水解，是进行蛋白药物肽图分析的有效手段。这里来看一个用Jupiter 300 3μm C18 肽图分析的例子。人干扰素α中的两个二硫键（cys1-cys98；cys29-cys138）用胰蛋白酶水解并用DDT还原。下图α干扰素经胰蛋白酶水解（蓝色谱图）和胰蛋白酶水解后用DDT处理（红色谱图）经Jupiter 300 3μm C18 分析的肽图。我们可以明显的发现二硫键水解后经DDT处理会产生明显的差异。局部放大后存在着更为明显的肽图差异，这是更利于进行质谱分析的结果

局部放大

局部放大

为了更好的筛选适合肽图分析的键合相，我们选取Jupiter 300 3μm C18 和 Jupiter Proteo 4μm C12进行肽图比较。这实际上是在考察键合相C18与C12，以及孔径90 Ǻ 和300 Ǻ分别对α干扰素肽图分析的影响。如图5所示， 虽然两款Jupiter 色谱柱都可以获得较好的肽图，但经局部放大后可见Jupiter 300 3μm C18 具有更适合的保留能力。虽然Jupiter Proteo 4μm C12 由于更大的比表面积和键合密度会提供更优的分辨率，但在这个例子中，Jupiter 300 3μm C18 具有更好的肽图结果。

除了肽图外，反相色谱还常用于分析蛋白质的折叠形态。尤其是在E.大肠杆菌产生的重组蛋白，折叠形态分析通常是质量控制中的一部分。下面我们来看看，α干扰素在DDT及高温条件下，利用Jupiter 300 5μm C4 和 Jupiter 300 3μm C18进行折叠和未折叠状态蛋白的分析比较。

结果可见，Jupiter 300 3μm C18（蓝色）较Jupiter 300 5μm C4（红色）具有更高的分辨率，同时检测到了含量低于5%的杂质。

同时，上图的完整蛋白分析中也表明Jupiter  300 3μm C18（蓝色）较Jupiter 300 5μm C4 （红色）具有更高的分辨率。

肽图和完整蛋白分析是治疗性蛋白药物结构分析和质量控制的重要手段，通过比较Jupiter 多种键合相的筛选结果，我们发现Jupiter 300 3μm C18是用于α干扰素肽图和完整蛋白分析的更佳选择

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